熒光顯微鏡已成為一個研究生物分子
點擊次數(shù):1039 更新時間:2017-11-22
熒光顯微鏡已成為一個研究生物分子
在過去的幾十年中,熒光顯微鏡已成為一個研究生物分子,途徑和在活細(xì)胞,組織和整體動物動力學(xué)的各種各樣的*的工具。相反)其他技術(shù)(如電子顯微鏡,熒光成像是與正在保持文化,使一個大跨度的時間尺度上發(fā)生的事件微創(chuàng)光學(xué)觀察細(xì)胞兼容。
在空間分辨率方面,包括正電子發(fā)射斷層掃描,磁共振成像和光學(xué)相干斷層掃描技術(shù),可以產(chǎn)生動物和人類受試者在10厘米和10微米之間的決議的圖像,而電子顯微鏡和掃描探針技術(shù)具有zui高空間決議,往往接近分子和原子水平。
這兩個之間在解決權(quán)力在于光學(xué)顯微鏡。除了能夠形象的活細(xì)胞,熒光顯微鏡的所有形式(包括廣角,激光掃描,旋轉(zhuǎn)盤,多光子,和全內(nèi)反射的zui顯著的缺點)所帶來的好處是空間分辨率的限制。
濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位,由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號,各廠家名稱常不統(tǒng)一。濾板一般都以基本色調(diào)命名,前面字母代表色調(diào),后面字母代表玻璃,數(shù)字代表型號特點。如德國產(chǎn)品(Schott)BG12,就是種藍(lán)色玻璃,B是藍(lán)色的*個字母,G是玻璃的*個字母;我國產(chǎn)品的名稱已統(tǒng)一用拼音字母表示,如相當(dāng)于BG12的藍(lán)色濾板名為QB24,Q是青色(藍(lán)色)拼音的*個字母,B是玻璃拼音的*個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名,如K530,就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。還有的廠家的濾板*以數(shù)字命名,如美國Corning廠的NO:5-58,即相當(dāng)于BG12。
激發(fā)濾板根據(jù)光源和熒光色素的特點,可選用以下三類激發(fā)濾板,提供一定波長范圍的激發(fā)光。
紫外光激發(fā)濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過,阻擋400nm以上的可見光通過。
紫外藍(lán)光激發(fā)濾板:此濾板可使300~450nm范圍內(nèi)的光通過。
紫藍(lán)光激發(fā)濾板:它可使350~490nm的光通過。
zui大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達(dá)明色素)可用藍(lán)綠濾板(如B-7)激發(fā)。
近年開始采用金屬膜干涉濾板,由于針對性強,波長適當(dāng),因而激發(fā)效果比較玻璃濾更好。如西德Leitz廠的FITCKP490濾板和羅達(dá)明的S546綠色濾板,均遠(yuǎn)比玻璃濾板效果好。
激發(fā)濾板分薄厚兩種,一般暗視野選用薄濾板,亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些?;疽笫且垣@得zui明亮的熒光和的背景為準(zhǔn)。